HPLC staat op bijna elk analysecertificaat, en toch weten weinig mensen wat het precies betekent. In dit artikel leggen we uit hoe de techniek werkt, hoe je een chromatogram leest en waarom een zuiverheidspercentage niet alles zegt.
In het kort: HPLC scheidt de stoffen in een monster. Elke stof geeft een piek in een grafiek. De zuiverheid vertelt hoe groot de hoofdpiek is ten opzichte van alle pieken samen.
Wat is HPLC?
HPLC is de afkorting van high-performance liquid chromatography, in het Nederlands hogedrukvloeistofchromatografie. Het is een analysemethode waarmee een laboratorium de bestanddelen van een mengsel van elkaar scheidt en meet. Het is een van de meest gebruikte technieken om de zuiverheid van een stof te bepalen.
Hoe werkt het?
- Een klein hoeveelheid van het monster wordt opgelost en met een vloeistof (de mobiele fase) onder hoge druk door een kolom gepompt.
- De kolom is gevuld met een korrelig materiaal (de stationaire fase). Elke stof blijft daar net iets anders aan hangen.
- Stoffen die weinig hechten komen snel uit de kolom, stoffen die veel hechten komen later. Dat tijdsverschil heet de retentietijd.
- Aan het eind meet een detector, vaak op basis van UV-licht, hoeveel er op elk moment uit de kolom komt. Dat signaal wordt uitgezet tegen de tijd.
Hoe lees je een chromatogram?
De grafiek die uit de meting komt, heet een chromatogram. Op de horizontale as staat de tijd, op de verticale as de sterkte van het signaal. Elke stof geeft een piek.
- De hoofdpiek is de stof waar het rapport over gaat. Kijk of de retentietijd past bij die stof.
- Kleine pieken zijn andere stoffen in het monster, zoals restanten uit de productie.
- De hoogte en het oppervlak van een piek zeggen iets over de hoeveelheid. Het oppervlak onder de piek wordt gebruikt om te rekenen.
Hoe wordt de zuiverheid berekend?
De zuiverheid wordt meestal uitgedrukt als oppervlakpercentage: het oppervlak van de hoofdpiek gedeeld door het totale oppervlak van alle pieken, maal 100. Is de hoofdpiek 99 van de 100 delen, dan is de zuiverheid 99%.
Waar het percentage niet over gaat
Een zuiverheid van 99% is een goed cijfer, maar het vertelt niet het hele verhaal. Het percentage zegt niets over stoffen die de detector niet ziet, zoals water en bepaalde zouten. Het zegt ook niet hoeveel van de stof er in totaal in de verpakking zit. Dat heet het gehalte en wordt met een andere meting bepaald. Kijk dus altijd naar beide, en naar de methode. Meer daarover lees je in ons artikel Hoe lees je een analysecertificaat (COA)?
Andere tests die je op een certificaat kunt tegenkomen
- Massaspectrometrie (MS) bepaalt de massa van de stof en laat zien of het inderdaad de verwachte verbinding is.
- Gehaltebepaling meet hoeveel van de stof er in het materiaal zit, bijvoorbeeld in milligram.
- Vocht- en restoplosmiddelentests laten zien wat er naast de stof nog in zit.
Waar let je op bij een HPLC-rapport?
- Staat het chromatogram erbij, of alleen een percentage?
- Is de gebruikte methode vermeld (kolom, detectiegolflengte)?
- Past de retentietijd van de hoofdpiek bij de stof?
- Zijn naam van het lab, datum en batchnummer vermeld?
De certificaten van VLT Labs staan per batch op de pagina Lab Results.
Frequently asked
Wat betekent HPLC?
HPLC staat voor high-performance liquid chromatography, in het Nederlands hogedrukvloeistofchromatografie.
Is 99% zuiverheid altijd genoeg?
Niet noodzakelijk. Het percentage laat alleen zien wat de detector ziet. Kijk ook naar het gehalte, de methode en of het batchnummer klopt.
Wat is een retentietijd?
Dat is de tijd die een stof nodig heeft om door de kolom te komen. Onder dezelfde omstandigheden is die tijd voor elke stof herkenbaar.
Alle producten van VLT Labs zijn uitsluitend bestemd voor laboratoriumonderzoek en niet voor menselijke of dierlijke consumptie. Dit artikel is bedoeld als algemene uitleg over analysetechnieken.